بررسی جمعیت میکروبی در خلط بیماران شیمیائی بوسیله تکنیک های وابسته و غیر وابسته به کشت

بسیاری از مصدومین شیمیایی به دلیل مواجه شدن با گاز سمی خردل، به بیماری های مزمن ریوی دچار میباشند. عفونت دستگاه تنفسی یکی از عوامل تشدید علائم بیماریهای مزمن ریوی است. بنابراین حذف عفونت تنفسی در این بیماران در کاهش علائم بیماری های مزمن ریوی موثر است. لذا هدف از این مطالعه بررسی جمعیت میکروبی در خلط بیماران شیمیایی است، که به دو روش وابسته به کشت و غیر وابسته به کشت انجام میشود. در تکنیک وابسته به کشت، به منظور جداسازی عوامل میکروبی از محیط های کشت عمومی نظیر بلاد آگار و سابروز دکستروز آگار استفاده شد. پس از انجام کشت مجدد از کلنی های جدا شده، رنگ آمیزی گرم انجام شد. با توجه به نتیجه ی رنگ آمیزی گرم، به منظور شناسایی میکروبی از تست های افتراقی متنوع نظیر تست کوآگولاز و تست حساسیت آنتی بیوتیکی استفاده شد. تکنیک pcr-dgge به عنوان یکی از تکنیک های غیر وابسته به کشت برای شناسایی باکتری غالب در نمونه های خلط مورد استفاده قرارگرفت. در این تکنیک پس از استخراج dna و انجام pcrبه کمک پرایمرهای یونیورسال، محصولات pcr که حاوی قطعات 16s rdna متعلق به باکتری های متنوع بودند در ژل حاوی ماده دناتوره کننده (اوره و فرم آمید) لود شده و الکتروفورز انجام شد. پس از جدا شدن قطعات متفاوت dna بر روی ژل، باند تکرار شونده در نمونه های مختلف جداسازی شد و با انجام pcr، مجدداً تکثیر شد.سپس آنالیز فیلوژنتیک بر اساس توالی انجام شد. در تکنیک کشت باکتری staphylococcus aureus به عنوان باکتری غالب در نمونه های مورد بررسی شناسایی شد. تکنیک pcr-dgge نیز نشان داد که باکتری staphylococcus aureusباکتری تکرار شونده در نمونه هاست. از آنجائیکه روش های سنتی شناسایی میکروبی بسیار وقت گیر بوده و دارای دقت پایین میباشد، تکنیک pcr-dgge میتواند به عنوان یک تکنیک سریع و کارآمد برای بسیاری اهداف از جمله شناسایی باکتری غالب در جمعیت های میکروبی مورد استفاده قرار گیرد.